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今天主要來講講熒光定量PCR檢測原理
熒光定量PCR光學(xué)檢測系統(tǒng):
1、光源:五個LED,各LED激發(fā)波長不同,保證每個通道的熒光素由優(yōu)質(zhì)的激發(fā)光激發(fā)。
2、探測器:CCD,確保整板同時檢測,數(shù)據(jù)間可比性強(qiáng)。
3、激發(fā)波長范圍:475nm-640nm。
4 發(fā)射波長范圍:520nm-740nm。
5、五個檢測通道:可同時能做四色檢測。
6、線性范圍:11個數(shù)量級。
7、靈敏度:可檢測到單拷貝。
所謂實(shí)時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測方法:
1、SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖(單一峰圖表明PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的單一性)。
2、TaqMan探針法:
探針完整時,報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。

上海睿玥實(shí)驗(yàn)器材有限公司主營產(chǎn)品:全自動熔點(diǎn)測定儀,梯度PCR基因擴(kuò)增儀,平行反應(yīng)合成儀
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