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無乳鏈球菌（Strep. agalactiae）和金黃色葡萄球菌（Staph. aureus）被認為是奶牛乳腺炎的重要傳染性病原，然而這兩種病原最近都從奶牛乳房外和環(huán)境中分離出來，表明除乳房以外的其他部位可能有這兩種病原傳播并導(dǎo)致乳房內(nèi)感染。可以使用檢測乳房外部位病原的診斷方法，但診斷方法仍需要驗證。本研究的目的是評價丹麥 Mastit4 qPCR檢測試劑盒和細菌培養(yǎng) (BC) 方法在來自牛奶和乳頭皮膚樣本中檢測無乳鏈球菌（Strep. agalactiae）和金黃色葡萄球菌（Staph. aureus）中的靈敏度(Se) 和特異性 (Sp)比較。從具有自動擠奶系統(tǒng)的8個無乳鏈球菌陽性的丹麥奶牛場中隨機選擇了 30-40 頭體細胞計數(shù)高的奶牛，從右后方 (n = 287) 收集乳頭皮膚樣品和無菌牛奶樣品用于細菌培養(yǎng)和 qPCR 檢測分析，靈敏度(Se) 和特異性 (Sp)采用貝葉斯統(tǒng)計分析來評價。對于牛奶樣品，無乳鏈球菌 qPCR檢測的靈敏度(Se) 和特異性 (Sp)分別為 0.97 和 0.99，而細菌培養(yǎng)的靈敏度(Se) 和特異性 (Sp)分別為 0.41 和 1.00。 金黃色葡萄球菌的靈敏度(Se) 和特異性 (Sp)分別為0.95 和 0.99，而傳統(tǒng)細菌培養(yǎng)的靈敏度(Se) 和特異性 (Sp)分別為 0.54 和 0.77。對于乳頭皮膚樣本，無乳鏈球菌 qPCR檢測的靈敏度(Se) 和特異性 (Sp)分別為 0.97 和 0.96，而傳統(tǒng)細菌培養(yǎng)的靈敏度(Se) 和特異性 (Sp)分別為 0.33 和 1.00。金黃色葡萄球菌的靈敏度(Se) 和特異性 (Sp)分別為0.94 和 0.98，而傳統(tǒng)細菌培養(yǎng)的靈敏度(Se) 和特異性 (Sp)分別為 0.44 和 0.74。總之，用于檢測無乳鏈球菌（Strep. agalactiae）和金黃色葡萄球菌（Staph. aureus）qPCR試劑盒靈敏度(Se)比細菌培養(yǎng)方法要高，這表明 qPCR方法是一種有價值的方法，可用于檢測牛奶樣品中的這兩種病原。細菌培養(yǎng)法與 qPCR方法相比，細菌培養(yǎng)法在檢測乳頭皮膚上的無乳鏈球菌（Strep. agalactiae）和金黃色葡萄球菌（Staph. aureus）方面的性能較差，這表明在將這兩種方法作為乳頭皮膚定植菌的常規(guī)檢測方法時，應(yīng)考慮兩種方法的目標條件的差異。細菌培養(yǎng)發(fā)的低靈敏度可能會妨礙使用細菌培養(yǎng)進行皮膚檢測，而 qPCR方法更適合這項檢測。